《生化危机3》的故事发生在《生化危机2》前，前半部分主要讲述了女主角吉尔在浣熊市调查安布雷拉公司地下业务的过程中遭遇生化兵器“追踪者”的袭击而感染了T病毒，于是她的同伴卡洛斯便到安布雷拉公司旗下的附属医院寻找解药；在后半段的故事中，吉尔已经恢复健康，她需要在有限的时间内逃离即将被导弹炸毁的浣熊市，并与“追踪者”展开最后的殊死对决。
首先，游戏中依然有两个角色的故事版本。生化3重制版包含吉尔和卡洛斯的个人故事剧情。同样的，女角色的故事游戏难度会比男角色简单许多。你可以在游戏的剧情，进展，角色使用的武器等方面，明显感觉到他们的区别。你需要操控吉尔或卡洛斯，按照故事进展，进行任务物品的搜集，并完成解密，推动剧情的发展。在这过程中，你会遇到僵尸和超能变异人的袭击，当然可能还包括一些迷宫或道路被意外破坏的情形。在游戏中，你得尽可能躲避丧尸或使用武器将它们制服。不要被丧尸和其它敌人咬到，当主角生命值变得危险之后，很有可能就会迎来死亡的结局。
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